【苯并芘检测方法】一种食用油中苯并芘的快速检测方法与流程

本发明涉及食品检测技术领域,具体是一种食用油中苯并芘的快速检测方法。

背景技术:

苯并芘又称苯并(а)芘,英文缩写BaP,是一类具有明显致癌作用的有机化合物。它是由一个苯环和一个芘分子结合而成的多环芳烃类化合物。经检测,多次使用的高温植物油、油炸过火的食品都会产生B(a)P,反复使用高温煎炸方式,食物中的有机质受热分解,经环化、聚合而形成B(a)P等致癌成分。

植物油中常发生苯并芘超标的事件,1996年巴西市场上的40种橄榄油样品均被检出含有苯并芘,最高含量达164微克/千克。2001年7月《新华每日电讯》报道西班牙的橄榄油中BaP含量超标,主要认为是二次提炼的橄榄油。

2006年10月,《消费日报》和《福州日报》报道湖北、安徽等地生产的芝麻油BaP超标。2010年9月以来,国内多家山茶油生产企业的产品被检出高致癌物苯并芘超标,引发业内极度震荡,造成消费者对山茶油产品缺乏信心,使山茶油市场受到极大的打击,不利于山茶油产业的健康快速发展。

按照中国GB2716-2005《食用植物油卫生标准》要求,在食用植物油类产品中苯并芘的安全限量为不超过10微克/千克。

常用的检测苯并芘的方法有薄层层析法,荧光分光光度法,气相色谱法,气相色谱-质谱法,高效液相色谱紫外法,高效液相色谱荧光法。其中荧光法有灵敏度高,重现性好等优点,是较常用的方法。然而,目前的苯并芘检测方法中,样品的前处理方法复杂,步骤繁琐,很容易在前处理样品过程中由于操作不慎吸入或皮肤接触到苯并芘,这给实验人员的安全带来了极大的威胁。

技术实现要素:

本发明的目的在于提供一种操作简便而安全、低成本、结果准确的食用油中苯并芘的快速检测方法。

为实现上述目的,本发明提供如下技术方案:

一种食用油中苯并芘的快速检测方法,包括以下步骤:

(1)供试品溶液的制备:准确称取食用油样品适量于具塞锥形瓶中,加入相当于食用油样品16~18倍量的有机溶剂,加塞后振摇;超声提取15~22min,离心后收集上清液;残留食用油样品中再加入相当于残留食用油样品8~12倍量的有机溶剂,超声提取12~18min,离心,合并上清液;取有机溶剂加入固相萃取柱进行活化,活化完成后将合并的上清液转移到活化后的固相萃取柱中,用有机溶剂洗脱,收集洗脱液至量瓶,定容,过0.

22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(2)标准品溶液的制备:配制浓度为1µg/kg、2.5µg/kg、5µg/kg、10µg/kg、20µg/kg、30µg/kg的苯并芘标准系列溶液,定容溶液为有机溶剂,摇匀后过0.22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(3)检测:依次将苯并芘标准系列溶液和供试品溶液注入HPLC,HPLC检测条件为:ODS柱;柱温:30℃;梯度洗脱与流动相的对应关系:0~3min,乙腈5~10%、甲酸10~15%、水75~85%;3→10min,乙腈15~25%、甲酸20~25%、水50~65%;10→13min,乙腈35~50%、甲酸15~20%、水30~50%;13→20min,乙腈70~80%、甲酸10~15%、水5~20%;荧光检测器:激发波长350nm,发射波长420nm。

作为本发明进一步的方案:所述的有机溶剂为氯仿、丙酮、苯、甲苯、二甲苯、乙醚、石油醚和环己烷中的任一种。

作为本发明进一步的方案:所述的步骤(1)中,超声提取工艺参数为:超声波频率为35~40kHz、超声波功率为400~450W;超声提取时需用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住。

作为本发明进一步的方案:所述的步骤(1)中,食用油样品的超声提取工艺参数为:超声波频率为40kHz、超声波功率为400W,时间为20min;残留食用油样品的超声提取工艺参数为:超声波频率为35kHz、超声波功率为450W,时间为15min。

作为本发明进一步的方案:所述的步骤(1)中,离心速率为12000~18000r/min,时间为5~10min。

作为本发明进一步的方案:所述的步骤(1)中,离心速率为15000r/min,时间为8min。

作为本发明进一步的方案:所述的步骤(1)中,固相萃取柱的活性完成标准为:取有机溶剂加入固相萃取柱进行活化,至有机溶剂自然下滴18~22ml,活化完成。

作为本发明进一步的方案:所述的步骤(1)中,固相萃取柱的活性完成标准为:取有机溶剂加入固相萃取柱进行活化,至有机溶剂自然下滴20ml,活化完成。

作为本发明进一步的方案:所述的步骤(3)中,梯度洗脱与流动相的对应关系:0~3min,乙腈8%、甲酸12%、水80%;3→10min,乙腈20%、甲酸22%、水58%;10→13min,乙腈42%、甲酸18%、水40%;13→20min,乙腈75%、甲酸12%、水13%。

与现有技术相比,本发明的有益效果是:

本发明首先采用两次超声提取,再用固相萃取柱富集纯化食用油样品中的苯并芘,该法操作简便,步骤简单,减少了人为误操作导致吸入或皮肤接触到苯并芘的几率,大大提高了实验人员工作的安全性,并且该法中的苯并芘提取完全,并得到了一定的纯化效果,使进入高效液相色谱检测时无杂质峰干扰,检测结果准确,真实可靠。本发明使用梯度洗脱的方式洗脱苯并芘,该法洗脱时间短,并能保证苯并芘洗脱完全,节约时间和流动相,使检测成本低。

具体实施方式

下面将结合本发明实施例,对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述,显然,所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例,而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例,本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例,都属于本发明保护的范围。

实施例1

本发明实施例中,一种食用油中苯并芘的快速检测方法,包括以下步骤:

(1)供试品溶液的制备:准确称取食用油样品适量于具塞锥形瓶中,加入相当于食用油样品16倍量的石油醚,加塞后振摇;用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住后,超声提取,超声波频率为35kHz、超声波功率为400W,时间为22min,12000r/min离心10min,收集上清液;残留食用油样品中再加入相当于残留食用油样品12倍量的石油醚,用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住后,超声提取,超声波频率为35kHz、超声波功率为400W,时间为18min,12000r/min离心10min,合并上清液;取石油醚加入固相萃取柱进行活化,至石油醚自然下滴18ml,活化完成后将合并的上清液转移到活化后的固相萃取柱中,用石油醚洗脱,收集洗脱液至量瓶,定容,过0.

22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(2)标准品溶液的制备:配制浓度为1µg/kg、2.5µg/kg、5µg/kg、10µg/kg、20µg/kg、30µg/kg的苯并芘标准系列溶液,定容溶液为石油醚,摇匀后过0.22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(3)检测:依次将苯并芘标准系列溶液和供试品溶液注入HPLC,HPLC检测条件为:ODS柱;柱温:30℃;梯度洗脱与流动相的对应关系:0~3min,乙腈5%、甲酸10%、水85%;3→10min,乙腈15%、甲酸20%、水65%;10→13min,乙腈35%、甲酸15%、水50%;13→20min,乙腈70%、甲酸10%、水20%;荧光检测器:激发波长350nm,发射波长420nm。

实施例2

本发明实施例中,一种食用油中苯并芘的快速检测方法,包括以下步骤:

(1)供试品溶液的制备:准确称取食用油样品适量于具塞锥形瓶中,加入相当于食用油样品18倍量的二甲苯,加塞后振摇;用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住后,超声提取,超声波频率为40kHz、超声波功率为450W,时间为15min,18000r/min离心5min,收集上清液;残留食用油样品中再加入相当于残留食用油样品8倍量的二甲苯,用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住后,超声提取,超声波频率为40kHz、超声波功率为450W,时间为12min,18000r/min离心5min,合并上清液;取二甲苯加入固相萃取柱进行活化,至二甲苯自然下滴22ml,活化完成后将合并的上清液转移到活化后的固相萃取柱中,用二甲苯洗脱,收集洗脱液至量瓶,定容,过0.

22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(2)标准品溶液的制备:配制浓度为1µg/kg、2.5µg/kg、5µg/kg、10µg/kg、20µg/kg、30µg/kg的苯并芘标准系列溶液,定容溶液为二甲苯,摇匀后过0.22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(3)检测:依次将苯并芘标准系列溶液和供试品溶液注入HPLC,HPLC检测条件为:ODS柱;柱温:30℃;梯度洗脱与流动相的对应关系:0~3min,乙腈10%、甲酸15%、水75%;3→10min,乙腈25%、甲酸25%、水50%;10→13min,乙腈50%、甲酸20%、水30%;13→20min,乙腈80%、甲酸15%、水5%;荧光检测器:激发波长350nm,发射波长420nm。

实施例3

本发明实施例中,一种食用油中苯并芘的快速检测方法,包括以下步骤:

(1)供试品溶液的制备:准确称取食用油样品适量于具塞锥形瓶中,加入相当于食用油样品17倍量的氯仿,加塞后振摇;用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住后,超声提取,超声波频率为40kHz、超声波功率为400W,时间为20min,15000r/min离心8min,收集上清液;残留食用油样品中再加入相当于残留食用油样品10倍量的氯仿,用封口膜将具塞锥形瓶的瓶口封住后,超声提取,超声波频率为35kHz、超声波功率为450W,时间为15min,15000r/min离心8min,合并上清液;取氯仿加入固相萃取柱进行活化,至氯仿自然下滴20ml,活化完成后将合并的上清液转移到活化后的固相萃取柱中,用氯仿洗脱,收集洗脱液至量瓶,定容,过0.

22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(2)标准品溶液的制备:配制浓度为1µg/kg、2.5µg/kg、5µg/kg、10µg/kg、20µg/kg、30µg/kg的苯并芘标准系列溶液,定容溶液为氯仿,摇匀后过0.22µm微孔滤膜至进样瓶,备用;

(3)检测:依次将苯并芘标准系列溶液和供试品溶液注入HPLC,HPLC检测条件为:ODS柱;柱温:30℃;梯度洗脱与流动相的对应关系:0~3min,乙腈8%、甲酸12%、水80%;3→10min,乙腈20%、甲酸22%、水58%;10→13min,乙腈42%、甲酸18%、水40%;13→20min,乙腈75%、甲酸12%、水13%;荧光检测器:激发波长350nm,发射波长420nm。

本发明首先采用两次超声提取,再用固相萃取柱富集纯化食用油样品中的苯并芘,该法操作简便,步骤简单,减少了人为误操作导致吸入或皮肤接触到苯并芘的几率,大大提高了实验人员工作的安全性,并且该法中的苯并芘提取完全,并得到了一定的纯化效果,使进入高效液相色谱检测时无杂质峰干扰,检测结果准确,真实可靠。本发明使用梯度洗脱的方式洗脱苯并芘,该法洗脱时间短,并能保证苯并芘洗脱完全,节约时间和流动相,使检测成本低。

对于本领域技术人员而言,显然本发明不限于上述示范性实施例的细节,而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下,能够以其他的具体形式实现本发明。因此,无论从哪一点来看,均应将实施例看作是示范性的,而且是非限制性的,本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定,因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。

此外,应当理解,虽然本说明书按照实施方式加以描述,但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案,说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见,本领域技术人员应当将说明书作为一个整体,各实施例中的技术方案也可以经适当组合,形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。