竹节秋海棠组织培养及快速繁殖
以MS为基本培养基。诱导愈伤组织培养基:(1)MS+BA3——5mg/L(单位下同)+NAA0.1——0.5。丛生芽增殖培养基。(2)MS+BA1.0+NAA0.1。(3)MS十BA0.5十NAA0.1。
(4)壮苗培养基:1/2MS(液体)。(5)诱导生根培养基:1/2MS +NAA0.2。上述培养基均加3.0%蔗糖、0.8%琼脂,pH值5.8。培养温度(24±2)℃,光照不宜过强,有80Olx左右即可,光照10h/d。
(一)无菌材料获得 将竹节秋海棠已平展之幼嫩叶片、叶柄、茎段先用适量洗衣粉对水洗涤,然后用自来水反复冲洗,于无菌条件下用75%酒精药棉擦拭干净,放于饱和漂***溶液10分钟,后置于0.1%升汞溶液中消毒2分钟,用无菌水冲洗5——6次,消毒滤纸吸收干表面水分,叶片切成0.5cm见方小块,叶柄、茎段则切成约长1cm左右长条,均接种于培养基(1)上。
(二)丛芽的诱导与增殖 接种、培养1周后,叶、叶柄、茎段周围开始膨大、增厚,质地变硬,逐渐形式黄绿色愈伤组织,3周后渐渐分化出小芽点,芽点继续生长,约5周左右形成明显的丛生芽。将丛生芽切成小块,接种于(2)和(3)培养基上进行增殖,小芽丛上不断分化出很多幼芽。叶、叶柄、茎段在两个培养基上增殖速率基本相同,约4周左右继代1次,增殖系数可达6——9。
(三)壮苗 在进行大量增殖阶段后,我们停止固体培养而改为液培,将分化芽转接到1/2MS,3周后,可发现生长健壮、个体粗壮的无根苗。这为以后生根、移苗出瓶,提高适应外界环境,增强抗病能力,提供了良好条件,移栽更易成活。
(四)根的诱导 将高约3cm、生长健硕的无根壮苗,接种到培养基(5)上。2周后,苗基部长出辐射状白色小根,每株生根5——7条,3周后,根伸长至1.0——1.5cm,生根率达100%。
(五)试管苗的移栽 将培养有试管苗的三角瓶盖打开,在实验室通风处炼苗3d,取出小苗,洗去根部残留培养基,种植前根部在0.2%Na2SO4溶液中滞留片刻。移栽到用高压灭菌消毒过的蛭石+细沙+园土(1:1:1)的混合基质中,地上部喷施0.1%多菌灵溶液,用薄膜覆盖,每天喷水2次,1周后揭膜,成活率在95%以上。
